ราชินีลูกทุ่ง เป็นเรื่องราวของสาวน้อยชื่อ กุ้งนาง (พิงค์กี้ สาวิกา) ผู้มีพรสวรรค์ในการร้องเพลงลูกทุ่ง แต่เธอกลับถูกแม่แก้วตา (ศิรินทรา นิยากร) ห้ามไม่ให้ร้องเพลงลูกทุ่งเด็ดขาด โดยไม่รู้เหตุผลที่แท้จริง จนกระทั่งวันหนึ่ง แม่ของกุ้งนางเกิดป่วยหนัก กุ้งนางต้องการหาเงินมารักษาแม่ จึงไปประกวดร้องเพลงลูกทุ่ง แต่ผลการแข่งขันเธอได้เพียงตำแหน่งรองชนะเลิศ ทำให้เงินรางวัลที่ได้ไม่พอค่ารักษา แม้จะได้เงินจากการช่วยเหลือของ ครูชาตรี (สุรชัย…
ในปี พ.ศ. 2479 ณ ท้องทุ่งบางกะปิ ไอ้ขวัญลูกผู้ใหญ่เขียน หนุ่มเลือดนักเลงรูปงามมีเพื่อนสนิท คือ ไอ้เฉ่ง ไอ้เยื้อน ไอ้สมิง ไอ้เปีย ผู้ใหญ่เขียนรักไอ้ขวัญมากจึงไม่คิดที่จะมีเมืยใหม่ แล้วความวุ่นวายก็เกิดขึ้นเมื่อ นายเรืองและไอ้เริญ รุกล้ำที่นาของผู้ใหญ่เขียนและเกิดเป็นคดีความขึ้น แต่นายเรืองแพ้จึงประกาศตัวเป็นศัตรูกับผู้ใหญ่เขียน แต่เหมือนเป็นกรรมเก่าที่ทำร่วมกันมา เพราะขวัญเกิดไปชอบพอกับเรียม ลูกสาวนายเรือง…